Az autoklávban történő sterilizálás három különböző szakaszból áll:
Levegő eltávolítás: Ebben a kezdeti szakaszban az autokláv eltávolítja a levegőt a kamrából. A vákuumszivattyú kiszívja a levegőt, alacsony nyomású környezetet teremtve. Ez a lépés biztosítja, hogy a gőz minden területen hatékonyan behatoljon, és elérje a terhelést a megfelelő sterilizálás érdekében.
Sterilizálás: A levegő eltávolítása után az autokláv belsejében a hőmérséklet eléri a megfelelő szintet. A nyomás alatt keletkező telített gőz elpusztítja a baktériumokat, vírusokat és más mikroorganizmusokat. A sterilizálás szokásos hőmérséklete 121 fok 1,1 kilogramm/négyzetcentiméter (kg/cm²) nyomáson (15 font/négyzethüvelyk (lb/in²)). Az autoklávozás időtartama a terhelés mennyiségétől függően változik, de általában 15-20 percnek tekintik.
Hűtés/szárítás: Sterilizálás után a gőz kienged, és az autokláv lehűl. Ha a hőmérséklet biztonságos, kinyitják az ajtót, és a sterilizált cikkek használatra készek.
A hatékony levegő eltávolítás, a cikkek megfelelő elhelyezése és a megfelelő melegítési idő kulcsfontosságú a sikeres autokláv sterilizáláshoz.